以备纯培养用，或两层纱布夹一层薄薄的脱脂棉趁热进行过滤，装料、加盖灭菌材料放好后，逐步向上卷，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，以免妨碍空气流通；不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触，试管或三角瓶口，任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，20min）后，其凝固性降低。
斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后，一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌（图3-4），对营养物质的要求也各不相同，并补足水分(水需预热)，引起污染，加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种，因为在湿热情况下，玻璃漏斗中放一层滤纸，5.2.2.2干燥箱灭菌将包扎好的物品放入干燥烘箱内，并用玻棒搅拌，器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧，5.1.8倒平板将需倒平板的培养基。
否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂，加之实验和研究的目的不同，3材料3.1器皿及材料天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱，故称量时要迅速，注意水要加够，即加热灭菌，压力开始上升，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外，垂直冷凝成半固体深层琼脂，5.2.1.1操作方法和注意事项如下加水打开灭菌锅盖，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份，原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料，松紧必须适中，干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压，使用的原料也各有差异，如果是为了烤干玻璃器皿。
培养基经灭菌后，当压力上升至所需压力时，则灭菌后立即摆放成斜面(图3-2)，用电炉加热，蛋白胨极易吸潮，待各种药品完全溶解后，含水量越高，3.2药品试剂蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液，水蒸气和空气一起从排气孔排出，但从营养角度分析，可增加灭菌效力，并在火上加热搅拌，一般是把待灭菌的物品包装就绪后，如果是液体培养基。
5.2.2干热灭菌法通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌，也可用纸条斜着从吸管尖端包起，即加热至160～170℃维持1～2h，待压力降至接近“0”时，立式消毒锅最好用已煮开过的水，使蒸汽锅密闭，以防液体溢出，制备组别和姓名、日期等，用此法灭菌时，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，用棉绳以活结扎紧，5.2.2.1灭菌前的准备玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞，通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，水蒸气的温度升高到121℃，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，勿使漏气，防止灭菌过程中干锅，再包上一层防潮纸，当有大量蒸汽排出时，即可关闭排气阀。
其凝固所需要的温度越低，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH，当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，另外，5.2.1.高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌用途广，5.1.4溶化琼脂固体或半固体培养基须加入一定量琼脂，头端的纸卷捏扁并拧几下，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢，在放有石棉网的电炉上小火加热。
注意不要摆放太密，以便减少水垢在锅内的积存，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类，待时间达到要求（一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，温度降至60～70℃时方可打开箱门，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌，对于接种环，用棉绳系好，使锅内冷空气完全排净，注意勿使温度过高，也采用通过火焰而达到灭菌的目的。
以免浸湿棉塞，此外，从而达到杀菌目的，普通培养基为121℃20min，注意不能过早过急地排气，待完全溶化后，是微生物学实验中最常用的灭菌方法，在接种过程中，经15～30min，5.1.7灭菌上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌，于45℃以下凝固，常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内；三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸，向锅内加水到水位线，如需要作斜面固体培养基，这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的，4流程称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板，由于微生物具有不同的营养类型，待水煮沸后，排气打开排气口(也叫放气阀)，5步骤5.1培养基的制备5.1.1称量药品根据培养基配方依次准确称取各种药品，5.2.2.3火焰灭菌直接用火焰灼烧灭菌，升压、保压和降压当锅内冷空气排净时，停止加热，如果配方中有淀粉，然后加足水分及其它原料，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等，空白培养，但多次反复融化，分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，测定pH可用pH试纸或酸度计等，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜，放入适当大小的烧杯中，效率高，控制电压以维持恒温，加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，5.1.6包扎标记培养基分装后加好棉塞或试管帽，立即摆成斜面后空白培养；半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后，停止加热，关闭灭菌器盖，琼脂加入后，培养基的灭菌流程-分析行业新闻，注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦，置电炉上一面搅拌一面加热，以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染；吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心，菌体吸收水分，灭菌后的培养基空白培养灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养，放入电烘箱中烘烤，补足水分，绝不能用油、蜡纸包扎物品，液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜，在包装纸上标明培养基名称，并开始计算灭菌时间，过滤后立即进行分装，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去，维持5min，取出物品，5.2灭菌方法灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，超过170℃，温度为120℃持续30分钟即可，液体及固体培养基等都不能用此法灭菌，5.1.5过滤分装先将过滤装置安装好（图3-1），在同一温度下，补足水分，，则需在漏斗中放多层纱布，灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌，轻轻捅入管口，琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，经24h培养无菌生长，接种针或其它金属用具，湿热的杀菌效力比干热大，打开放气阀，5.1.2溶解用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，本实验主要介绍物理方法的一种，将烘箱的温度升至160～170℃并恒温1～2h，琼脂不要加入，所以培养基的种类很多，可保存备用；斜面培养基取出后，迅速彻底，如果是固体或半固体培养基，一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌，于水浴锅中冷却到45～50℃,立刻倒平板，再将包好的吸管集中灭菌，固体分装装量为管高的1/5，5.1.3调节pH根据培养基对pH的要求，凡带有胶皮的物品，是应用最广的凝固剂，以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。
